JJF1815-2020《Ⅱ級生物安全柜校準(zhǔn)規(guī)范》將于4月27日正式實(shí)施。在抗擊疫情中，生物安全柜作為疫情檢測人員和科研人員安全防護(hù)屏障的最基本防護(hù)設(shè)備，性能可靠與否對使用人員安全起著至關(guān)重要的作用。為讓從事相關(guān)工作的計(jì)量人員更好的理解該規(guī)范，《中國計(jì)量》雜志社邀請JJF1815-2020的主要起草人，對JJF1815-2020進(jìn)行了解讀。
一、規(guī)范制定的必要性和意義
2003年以來，隨著重癥急性呼吸綜合征（SARS）病毒、高致病性禽流感病毒、埃博拉病毒、寨卡病毒、新型冠狀病毒等新發(fā)傳染病的不斷出現(xiàn)，我國一直都在加強(qiáng)對醫(yī)院、疾控部門、科研單位和高等院校等單位生物防護(hù)的監(jiān)管，并把生物安全納入國家安全體系。因此，生物安全柜作為疫情檢測人員和科研人員安全防護(hù)屏障的最基本防護(hù)設(shè)備，在醫(yī)療衛(wèi)生、疾病預(yù)防與控制、食品衛(wèi)生、生物制藥、環(huán)境監(jiān)測以及各類生物實(shí)驗(yàn)室等領(lǐng)域的應(yīng)用一直保持快速增長。
2013年國務(wù)院頒布的《計(jì)量發(fā)展規(guī)劃（2013-2020年）》明確將生物安全領(lǐng)域的計(jì)量溯源作為重點(diǎn)工作，生物安全柜作為生物安全領(lǐng)域重要的保障設(shè)備，其計(jì)量校準(zhǔn)工作則顯得尤為重要。生物安全柜是一種基于高效過濾和氣流動(dòng)力原理的負(fù)壓過濾排風(fēng)設(shè)備，它的主要作用是在保護(hù)樣本不被外界污染的同時(shí)，能夠更好地保護(hù)檢測人員不被操作的病原微生物所感染。因此，生物安全柜的性能可靠與否，不僅關(guān)系著實(shí)驗(yàn)的成敗，而且也關(guān)系著實(shí)驗(yàn)操作人員和醫(yī)護(hù)人員的安危。
目前，我國市場上的生物安全柜品牌和規(guī)格型號眾多，因此如何對生物安全柜進(jìn)行計(jì)量校準(zhǔn)，以確保其參數(shù)數(shù)據(jù)準(zhǔn)確和性能可靠顯得十分迫切與必要。JJF1815-2020《Ⅱ級生物安全柜校準(zhǔn)規(guī)范》在此背景下制定，于2020年1月17日批準(zhǔn)，自2020年4月17日實(shí)施。
二、主要內(nèi)容及重點(diǎn)解讀
1.結(jié)構(gòu)
JJF1815-2020依據(jù)JJF1071-2010《國家計(jì)量校準(zhǔn)規(guī)范編寫規(guī)則》的要求進(jìn)行編寫，共分范圍 、引用文件、術(shù)語和計(jì)量單位、概述、計(jì)量特性、校準(zhǔn)條件、校準(zhǔn)項(xiàng)目和校準(zhǔn)方法、校準(zhǔn)結(jié)果表達(dá)、復(fù)校時(shí)間間隔及附錄共10部分，其中附錄中包括碘化鉀法、校準(zhǔn)原始記錄格式、校準(zhǔn)證書（內(nèi)頁）格式和Ⅱ級生物安全柜校準(zhǔn)結(jié)果的測量結(jié)果不確定度評定示例等內(nèi)容。
2.適用范圍
JJF1815-2020適用于Ⅱ級生物安全柜的校準(zhǔn)，Ⅰ級和Ⅲ級生物安全柜相同原理部分的校準(zhǔn)可以參照本規(guī)范執(zhí)行。
3.起草原則與內(nèi)容
（1）術(shù)語和計(jì)量單位
生物媒介 、生物危害、下降氣流流速、下降氣流流速柵格、單向氣流、流入氣流、非均勻下降氣流、均勻下降氣流、生物安全柜標(biāo)稱寬度、生物安全等級、流速標(biāo)稱值、傘形罩排氣連接、直接排氣連接、高效過濾器、多分散氣溶膠、工作區(qū)、工作臺、前窗引用于NSF/ANSI49-2018《生物安全柜 設(shè)計(jì)、結(jié)構(gòu)、性能和現(xiàn)場認(rèn)證（Biosafety Cabinetry: Design, Construction, Performance, and Field Certification）》中的定義；交叉污染、產(chǎn)品保護(hù)、生物安全柜、保護(hù)因子引用了BS EN12469-2000《生物技術(shù) 微生物安全柜的性能標(biāo)準(zhǔn)（Biotechnology—Performance criteria for microbiological safety cabinets）》中的定義，前窗操作口高度引用了YY0569-2011《Ⅱ級生物安全柜》的定義。
（2）概述
概述中主要介紹了生物安全柜的應(yīng)用、分類，并對Ⅱ級生物安全柜的分型及其特點(diǎn)作了著重介紹，其中對Ⅰ級和Ⅲ級生物安全柜的描述有助于理解Ⅰ級和Ⅲ級生物安全柜與Ⅱ生物安全柜哪部分原理相同，當(dāng)Ⅰ級和Ⅲ級生物安全柜作為被校準(zhǔn)對象時(shí)可以參照本規(guī)范執(zhí)行。之外，相比以往發(fā)布的生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)中對Ⅱ級的分型，本規(guī)范新增Ⅱ-C1生物安全柜（NSF/ANSI49-2018新增類型，國內(nèi)已有公司開始銷售此型號），它兼具了A型和B型II級生物安全柜的特點(diǎn)。
（3）計(jì)量特性的確定
通過對生產(chǎn)廠家和用戶的調(diào)研，確定了下降氣流流速、流入氣流流速、潔凈度、照度、噪聲、高效/超高效過濾器檢漏等在生物安全柜使用過程中對安全和工作舒適性影響較大的指標(biāo)作為計(jì)量特性指標(biāo)。此外，氣流模式、人員保護(hù)、產(chǎn)品保護(hù)和交叉污染保護(hù)對生物安全柜的防護(hù)性能評價(jià)至關(guān)重要，其技術(shù)要求在校準(zhǔn)方法中予以規(guī)定，但沒有作為計(jì)量特性體現(xiàn)。計(jì)量特性的具體指標(biāo)根據(jù) WS233-2017《病原微生物實(shí)驗(yàn)室生物安全通用準(zhǔn)則》、YY0569-2011、BS EN12469-2000、NSF/ANSI49-2018、ISO14644-1:2015《潔凈室及相關(guān)受控環(huán)境 第1部分：依據(jù)粒子濃度對空氣潔凈度分級（Cleanrooms and associated controlled environments Part 1: Classification of air cleanliness by particle concentration）》、BS5726-3:1992《微生物安全柜規(guī)范 第3部分:安裝后性能規(guī)范（Microbiological safety cabinets Part 3: Specification for performance after installation）》、Clark R P, Goff M R. The Potassium Iodide Method for Determining Protection Factors in Open-fronted Microbiological Safety Cabinets[J]. Journal of Applied Bacteriology, 1981, 51(3):439、畢建軍, 溫占波, 趙建軍,等. 用粘質(zhì)沙雷菌試驗(yàn)評價(jià)Ⅱ級生物安全柜的研究[J]. 中國消毒學(xué)雜志, 2007, 24(1):4-8等標(biāo)準(zhǔn)和文獻(xiàn)確定。相比于BS EN12469-2000和NSF/ANSI49-2018兩個(gè)國際標(biāo)準(zhǔn)，本規(guī)范有一個(gè)特色是增加了潔凈度指標(biāo)，這主要是因?yàn)閃S233-2017中對生物安全設(shè)備的現(xiàn)場隔離檢查規(guī)定生物安全柜的潔凈度是必須檢測的指標(biāo)。同時(shí)，相比YY0569-2011更多關(guān)注儀器注冊檢驗(yàn)、型式評價(jià)或者產(chǎn)品設(shè)計(jì)的指標(biāo)，本規(guī)范則主要考慮到校準(zhǔn)現(xiàn)場的實(shí)際情況，重點(diǎn)參考了NSF/ANSI49-2018對現(xiàn)場測試指標(biāo)的設(shè)定，如平均背景照度不大于160lx時(shí)，生物安全柜平均照度應(yīng)不小于650lx，每個(gè)照度實(shí)測值應(yīng)不小于430lx；實(shí)際噪聲應(yīng)不大于70dB。
（4）校準(zhǔn)條件
本部分主要規(guī)定了生物安全柜校準(zhǔn)時(shí)需要滿足的環(huán)境條件，以及使用的校準(zhǔn)用材料及設(shè)備，包括Ⅱ級鋼卷尺、風(fēng)量計(jì)、風(fēng)速儀、煙霧發(fā)生裝置、塵埃粒子計(jì)數(shù)器、照度計(jì)、聲級計(jì)、高效過濾器檢漏儀、高效過濾器計(jì)數(shù)檢漏儀、智能生物安全柜生物檢測儀（微生物法）、生物安全柜質(zhì)量檢測儀（碘化鉀法）、微生物定量標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)、Φ90培養(yǎng)皿和多分散氣溶膠，明確了標(biāo)準(zhǔn)器及配套設(shè)備的測量范圍和準(zhǔn)確度等信息要求。相比以往的生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)，本規(guī)范針對標(biāo)準(zhǔn)器及配套設(shè)備配置的指導(dǎo)性更清晰明確。
（5）校準(zhǔn)方法
本部分主要針對生物安全柜的外觀、下降氣流流速、流入氣流流速、氣流模式、潔凈度、照度、噪聲、高效/超高效過濾器檢漏、人員保護(hù)、產(chǎn)品保護(hù)和交叉污染保護(hù)等指標(biāo)的具體校準(zhǔn)方法進(jìn)行了具體說明和示意圖展示，同時(shí)對下降氣流流速、流入氣流流速、潔凈度、照度和噪聲進(jìn)行了數(shù)學(xué)公式化處理，有助于后續(xù)校準(zhǔn)數(shù)據(jù)的分析處理。其中流入氣流流速測試用風(fēng)量計(jì)法或風(fēng)速儀法，優(yōu)先采用風(fēng)量計(jì)法；高效/超高效過濾器檢漏測試用光度法或計(jì)數(shù)法；人員、產(chǎn)品和交叉污染保護(hù)測試用微生物法或碘化鉀法，仲裁時(shí)用微生物法。碘化鉀法具有快速高效，且方便的特點(diǎn)，彌補(bǔ)了微生物法的周期慢，測試麻煩，生物制備價(jià)格高的缺點(diǎn)，是目前世界上普遍被認(rèn)可的先進(jìn)方法。相比于YY0569-2011等國內(nèi)生物安全柜標(biāo)準(zhǔn)僅在人員保護(hù)測試中采用碘化鉀法，本規(guī)范還在產(chǎn)品和交叉污染保護(hù)測試中增加了碘化鉀法。
（6）復(fù)校時(shí)間間隔
針對生物安全柜的檢測周期，國內(nèi)外標(biāo)準(zhǔn)條例中都分別給出了相應(yīng)規(guī)定。我國發(fā)布的GB19489-2008《實(shí)驗(yàn)室生物安全通用要求》，要求將生物安全柜作為一種必不可少的保護(hù)實(shí)驗(yàn)室工作人員的主要安全防護(hù)設(shè)備，在安裝或維修后應(yīng)按照經(jīng)確認(rèn)的方法進(jìn)行現(xiàn)場檢測，并且須按不大于12個(gè)月的周期進(jìn)行管理評審每年開展驗(yàn)證，同時(shí)要求實(shí)驗(yàn)室操作人員具備規(guī)范化、標(biāo)準(zhǔn)化使用生物安全柜的能力。國家衛(wèi)健委頒布的WS233-2017中規(guī)定，用于規(guī)范各級微生物和生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室的生物安全防護(hù)，要求生物安全隔離設(shè)備等需進(jìn)行一年一度的常規(guī)檢測。CNAS-AL02：2018《醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可申請書》的附表3（CNAS-CL02-A005）的5.3.1.4條款對自查評審內(nèi)容的設(shè)備校準(zhǔn)、驗(yàn)證等應(yīng)符合如下要求中的（c）部分：每12個(gè)月進(jìn)行檢定或校準(zhǔn)的設(shè)備至少應(yīng)包括生物安全柜（高效過濾器、氣流、負(fù)壓等參數(shù)）等。此外，在《有害健康物質(zhì)的控制（Control of Substances Hazardous to Health Regulations, COSHH）》條例中也規(guī)定，為保證生物安全柜工作的正常狀態(tài)，至少12個(gè)月要進(jìn)行一次詳細(xì)的檢查和測試，如果使用頻率高，建議至少每6個(gè)月1次。本規(guī)范通過參考借鑒以上標(biāo)準(zhǔn)條例，給出了復(fù)校時(shí)間間隔不超過1年的建議。
（7）不確定度評定示例
附錄D給出了下降氣流流速、流入氣流流速、潔凈度、照度和噪聲等五個(gè)參數(shù)的測量不確定度評定示例，其中在具體分析每個(gè)參數(shù)測量不確定度時(shí)，示例中由標(biāo)準(zhǔn)器引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量均是根據(jù)校準(zhǔn)用標(biāo)準(zhǔn)器的最大允許誤差進(jìn)行分析，后續(xù)建標(biāo)時(shí)各單位可根據(jù)各個(gè)實(shí)驗(yàn)室配置的標(biāo)準(zhǔn)器溯源證書的準(zhǔn)確度信息（如準(zhǔn)確度等級、不確定度或最大允許誤差）確定各自實(shí)驗(yàn)室由標(biāo)準(zhǔn)器引入的標(biāo)準(zhǔn)不確定度分量。
三、校準(zhǔn)中的注意事項(xiàng)
1.附錄A的A.1中給出了碘化鉀法的基本原理，經(jīng)過分析推導(dǎo)指出，一套測試系統(tǒng)的實(shí)際經(jīng)驗(yàn)值為：N≥3×108，s≥20 L/min，n≤4，由此確知Apf的最小值為1.5×105。在A.6中根據(jù)市場上常用測試系統(tǒng)確定的N、V、F、n值推算出的Apf技術(shù)要求為1.0×105，即相當(dāng)于過濾膜上的斑點(diǎn)數(shù)為62。如果后續(xù)建標(biāo)時(shí)所用測試系統(tǒng)的N、V、F、n值與附錄A的不一致，可根據(jù)所用測試系統(tǒng)的N、V、F、n值重新進(jìn)行計(jì)算得出其Apf作為技術(shù)要求。
2.生物安全柜中空氣經(jīng)過高效/超高效過濾器，垂直送風(fēng)，定量試驗(yàn)下的局部漏過率不超過0.01%，以保證內(nèi)循環(huán)氣體的無菌狀態(tài)，不需要額外的紫外殺菌。同時(shí)在生物安全柜使用或校準(zhǔn)過程中需要注意保持一定的自凈時(shí)間，一般為工作前和工作后（15~30）min。
3.實(shí)驗(yàn)室安裝的生物安全柜應(yīng)遠(yuǎn)離門、窗、回風(fēng)口和送風(fēng)口，以免影響生物安全柜的正常使用，如流入氣流流速、人員保護(hù)等會受生物安全柜放置位置的影響。
4.生物安全柜的核心要點(diǎn)是實(shí)現(xiàn)氣流平衡（氣流穩(wěn)定性）：當(dāng)風(fēng)機(jī)送風(fēng)量不變，HEPA/ULPA泄漏時(shí)，下降風(fēng)量變大，外排風(fēng)量減小，循環(huán)風(fēng)沒有經(jīng)過過濾，污染樣本，此時(shí)循環(huán)風(fēng)下降速度快，可能吹出生物安全柜，吹出的氣溶膠感染操作者；當(dāng)風(fēng)機(jī)送風(fēng)量不變，HEPA/ULPA被堵時(shí)，下降風(fēng)量變小，外排風(fēng)量變大，窗口進(jìn)風(fēng)量增大，可能污染樣本。實(shí)際校準(zhǔn)時(shí)，可根據(jù)校準(zhǔn)結(jié)果參考以上原則給客戶提供調(diào)整或維修建議。
5.人員、產(chǎn)品和交叉污染保護(hù)測試的目的是確定氣溶膠是否保留在生物安全柜內(nèi)、外部的污染物是否未進(jìn)入生物安全柜的工作區(qū)域，以及生物安全柜中裝置之間的氣溶膠污染是否減到最小。這個(gè)指標(biāo)是集高效過濾器檢漏、潔凈度、下降氣流流速、流入氣流流速和氣流模式的綜合指標(biāo)，也是生物安全柜的核心指標(biāo)，建議給具體客戶提供校準(zhǔn)項(xiàng)目建議時(shí)對該項(xiàng)目做重點(diǎn)說明。
注：隋志偉和崔宏恩為共同第一作者，戴新華為通訊作者。
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本文刊發(fā)于《中國計(jì)量》雜志2020年第3期
作者：隋志偉 高運(yùn)華 戴新華 中國計(jì)量科學(xué)研究院、崔宏恩 江蘇省計(jì)量科學(xué)研究院、 厲龍 蘇州市計(jì)量測試院
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